2R-1. 원핵세포에서 Chromosomal DNA와 Plasmid DNA의 형태학적인 차이점을 설명하라.
1) Chromosomal DNA 의 구조
: 원핵세포의 chromosomal DNA는 불규칙한 모양으로 핵양체(nucleoid)라는 부분에 모여 있다. 대부분의 원핵세포는 단일한 고리 모양의 이중나선 DNA(deoxyribonucleic acid)를 지니지만 어떤 세균은 선형 DNA를 염색
chromosomal location)을 찾기 위해 노력하고 있다. 튜렛 증후군에 대한 유전적 표식자(genetic marker)를 찾는 것은 튜렛 증후군에 대한 유전적 결함요인을 이해하는데 대한 중요한 스텝일 것이다. 이 표식자(marker)가 일단 발견되면 연구의 노력은 튜렛 증후군 유전자의 위치(locating)에 초점이 맞춰 질 것이다.
(3
concentration, DNA의 conformation(superhelical DNA > circular DNA > nicked circular DNA), Applied voltage, Intercalating dyes, Electrophoresis buffer의 composition과 ion strength.
(3) 전기영동 완충액(Buffer)
TAE(Tris-acetate EDTA): DNA 분자량이 큰 경우, agarose electrophoresis에서 쓴다.
TBE(Tris-borate EDTA): DNA 분자량이 작은 경우, DNA sequencing에 쓰인다.
nucleotide.
⑷ Taq polymerase : 유전자 합성효소. 효소이지만 열에 강하다.
5. PCR 반응 각 성분에 대해 고려할 점
⑴ Template DNA
선택하여 증폭하고자 하는 target DNA 단편을 가리키는 용어로서 세포내의 chromosomal DNA나 전염성 병원체의 DNA 또는 RNA로부터 제조한 complementary DNA(cDNA), plasmid DNA 등을 쓸 수 있다.
chromosomal DNA와 분리한 뒤 제한효소로 처리하여 접착성 말단을 갖는 DNA단편을 만든다. 다음에 다른 생물로부터 DNA를 분리, 정제하여 plasmid DNA에 사용한 것과 같은 제한효소로 처리한다. 처리된 두 종류의 DNA 분자들을 함께 섞어 두면 서로 상보적인 접착성 말단끼리 결합하게 되어 DNA 재조합이 일어난다.